逆转录酶是由Temin和Baltimore于1970年独立发现的酶,能够将RNA转录为cDNA,因而两人于1975年获得诺贝尔生理学或医学奖。这种酶的结构比较复杂,主要包含聚合酶域和RNaseH域,其中聚合酶域又分为“手指”、“手掌”、“拇指”三个亚域,分别负责模板结合、催化反应及结构支持。在分子生物学,尤其是在分子诊断领域,逆转录酶的应用至关重要。它使得对RNA病毒(如艾滋病、甲型流感和乙型流感等)的准确检测成为可能。
目前,M-MLV(莫洛尼鼠白血病病毒)逆转录酶是分子诊断中最常用的形式。然而,M-MLV逆转录酶在高温条件下稳定性较低,易发生失活,这对于其预混液在长期储存过程中的性能构成挑战,同时也限制了其在高温逆转录反应中的应用。因此,提高逆转录酶的稳定性是一个重要的研究方向。
在这一背景下,尊龙凯时的科研团队通过其子公司镁孚泰生物的ZymeEditor™创新型酶进化平台,成功研发出具备更高稳定性的M-MLV突变体。在研发过程中,团队运用理性/半理性设计的策略,对M-MLV进行结构-功能分析,结合多种技术手段,设计出提高稳定性的定点突变。
通过结合MTPS高通量筛选技术,团队对这些突变体进行了多维度的评估,最终获得了多个cDNA产量显著提升的突变体。相关实验数据显示,改造后的M-MLV突变体在储存6个月和12个月后的建库产量均优于对照WT,显示出更好的稳定性。
团队的研究成果为分子诊断试剂的开发提供了新的解决方案。通过对这些突变体进行全面的性能评估,特别是在稳定性测试、灵敏度分析与冻干技术的应用中,我们筛选出了表现最优的突变体进行产业化。
今天,我们十分高兴地推出由尊龙凯时创新研发的新品逆转录酶:HifairUCFME® Advanced逆转录酶(Cat#14614)。这款新型逆转录酶在稳定性方面有了显著提升,其合成cDNA的产量和灵敏度也达到了更高水平。此外,该产品由UCFME®超洁净分子酶生产基地制造,整个生产过程对材料、环境及质量等进行了严格把控,以确保极低的背景菌gDNA残留和核酸酶残留,为实验结果的准确性和可靠性提供了保障。
HifairUCFME® Advanced逆转录酶确保在低浓度模板的情况下,配合快速程序(逆转录2分钟),仍能高效扩增特异性靶标。与同类竞品相比,该逆转录酶在多个检测目标上的表现均优于竞品,有效支持精准检测,助力早筛早诊。
在条件一致的情况下,使用HifairUCFME® Advanced逆转录酶和竞品进行检测,结果表明,竞品在热加速处理后出现Ct值延后、荧光值降低,而我们的产品表现稳定,扩增曲线、荧光值,及Ct值均未发生变化,显示出HifairUCFME® Advanced逆转录酶的优越性。
不仅如此,这款逆转录酶在冻干状态下也能保持良好表现,确保在不同应用环境中的一致性和可靠性。在市场上,分子酶的质量良莠不齐,我们的目标是确保核酸残留极低,以提高扩增产物的特异性和准确性。
通过一系列严格的检测,HifairUCFME® Advanced逆转录酶在E coli基因组DNA残留检测中均未检出,符合高标准的要求,为样本检测的可靠性提供了有必要的支持。通过不同浓度RNA模板的实例,结果表明该酶不仅适用于RT-PCR/qPCR,也能在NGS建库中获得一致的文库质量。
如今,尊龙凯时的逆转录酶突变体库已开放申请,满足不同应用场景的需求。如果您对我们的产品感兴趣,欢迎扫描下方二维码与工作人员联系申请试用!