在生物医药领域中,mRNA技术如同一颗璀璨的明星,正在引领一场深刻的变革。从疫苗的新突破,到基因治疗、蛋白替代和基础研究的深入探索,mRNA技术凭借其独特的优势,成为科研界的宠儿。我们采访了备受全球关注的尊龙凯时,深入了解mRNA技术的优势及挑战。以下是合成mRNA面临的核心挑战与解决方案。
合成mRNA的核心挑战
1. 结构设计:高效优化,精益求精
☑ 使用cap1结构:通过高达90%以上的加帽率,为mRNA增添稳定的“盔甲”,提高其翻译效率并避免被免疫系统识别,可以通过共转录加帽或酶法加帽实现。
☑ 非翻译区(UTR):选择高翻译效率的序列,避免形成二级结构。
☑ 编码区(ORF):根据宿主(细胞或动物)的密码子偏好性进行调整,避免稀有密码子的影响。
☑ Poly(A)尾长度:将尾部长度控制在100-150个腺苷酸,以增强mRNA的稳定性和翻译效率。
2. 合成与质量控制:精确灵活,追求卓越
☑ 体外转录(IVT):采用高纯度的线性化DNA模板(质粒或PCR产物),避免内毒素的污染。
☑ 质量控制:在生产过程中,重视纯化以去除杂质;减少dsRNA含量以避免免疫风暴;并运用合适的技术手段评估mRNA样品的质量属性。
3. 递送系统:安全可控,高效送达
☑ 体外转染:选择合适的细胞类型,并依据情况选择转染试剂或电转,同时优化mRNA转染剂量(通常为0.5-2μg)和转染时间,以提升细胞转染效率。
☑ 体内递送:可采用脂质纳米颗粒(LNP)进行递送,以保护mRNA不受RNase降解并提高靶向性。同时,根据需求选择适合的给药途径,如肌肉注射或静脉注射。
4. 实验验证:严格快速,结果可信
☑ 表达评估:利用流式细胞术、Western blot、ELISA等方法对目标蛋白的表达进行验证,确认细胞水平的表达情况,并可使用荧光报告系统(如EGFP、Luciferase);或设计功能性测试(如基因编辑效率)。
☑ 免疫反应评估:检测炎症因子的水平(ELISA或qPCR)以及流式细胞术分析免疫细胞激活标志物。
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