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尊龙凯时|胎牛血清使用注意事项

发布时间:2025-03-14   信息来源:尊龙凯时官方编辑

尊龙凯时胎牛血清的标准储存温度为-20℃,若需长期保存可选择-80℃。在解冻时,避免将血清直接放置于常温(25-37℃)下,以免产生絮状沉淀,影响血清品质。理想的方法是将血清从-20/-80℃转移至4℃,待完全液化后,再移至室温。在此过程中,建议不时轻轻摇晃,以确保成分和温度均匀混合,减少沉淀的形成。

尊龙凯时|胎牛血清使用注意事项

解冻后的胎牛血清可使用15mL或50mL无菌离心管进行分装并冷冻保存。为了方便频繁配置培养基,可以在4℃下存放一管已解冻的血清,但不宜超过一个月的时间。解冻后的胎牛血清不应在37℃或室温下存放过久,以防止细胞生长因子的失活,影响细胞状态。

关于血清的添加量,通常建议为5%、10%或20%。大多数细胞的常规培养可使用10%血清浓度,部分细胞在原代提取时则使用20%血清。实际使用的血清浓度需根据细胞特性和实验目的进行调整。

热灭活是一个常见的步骤,通常在56℃下处理已解冻的血清30分钟,以去活化补体。补体在细胞培养中参与的反应包括溶细胞活性、平滑肌收缩等。对于常规细胞培养,热灭活并不是必需的,经过此处理的血清可能影响细胞生长速率及导致沉淀物增多。

在细胞培养中经常会遇到需要更换血清的情况。若直接使用另一种血清配置培养基,可能会导致细胞增殖速度减缓,甚至出现脱落死亡的现象。这通常是因为细胞已经适应原有培养环境,突然更换营养环境会导致不适应。建议在更换血清时采用梯度法,以保证细胞的适应性。

重启细胞时,建议使用原培养体系进行复苏,待细胞状态恢复后再进行测试。在测试时,不应直接100%更换新血清,而应按照比例逐步替换,如首次为新旧体系1:3,第二次为1:1,第三次为3:1,最后完全替换。对一些敏感细胞,需进一步细化替换比例。

解冻后如发现少量乳白色絮状或点状物质,这主要是血清中脂蛋白的变性和纤维蛋白造成的,对血清质量没有影响,通常可以进行400×g离心5分钟取上清,以减少对细胞的影响。

一般厂家提供的血清均为无菌,不需另行过滤。如果发现悬浮物,则可将血清与培养液一起过滤,而不是直接过滤血清。

如果在细胞培养过程中出现黑点,首先需观察培养基的清晰度及黑点的动向。如果细胞受到污染,微生物会迅速繁殖,培养基颜色会发生变化。若观察到细胞生长状态良好,黑点的生成可能与以下因素有关:(1) 细胞生长过程中自然破碎的残骸;(2) 血清中的杂蛋白,可能由反复冻融造成;(3) 配制培养基的水质或容器不合格。这些黑点可通过离心或过滤去除;(4) 原代细胞的小黑点可能是组织杂质,多次传代可消除。

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