一、实验目的

1. 学习紫外分光光度法在生物医疗中的应用原理

本实验旨在帮助学生理解紫外分光光度法的基本原理，并掌握其在生物样本中确定蛋白质含量的实验技术，同时也将熟悉UV-1700PC紫外-可见分光光度计的使用方法及其主要结构。

二、实验原理

紫外-可见吸收光谱法，又称紫外-可见分光光度法，是一种分析技术，主要研究分子在190nm至750nm波长范围内的光吸收特性。这种方法依赖于溶液中物质分子对特定波长光的选择性吸收。吸收光谱的来源是分子外层价电子的跃迁，形成的光谱称为分子光谱，属于带光谱。

定性分析

利用紫外-可见吸收光谱法进行定性分析时，常通过光谱比较法，将未知化合物的吸收特征与已知化合物进行对比。

定量分析

定量分析的依据为朗伯-比尔定律：A=lgI0/I=εbc。在一定浓度范围内，有色物质的吸光度与其浓度成正比。因此，通过测量样品在特定波长下的吸光度，可以推算出样品的浓度及含量。

在本实验中，我们重点关注在277nm至280nm处的蛋白质吸收峰。由于酪氨酸和色氨酸的苯环结构对紫外光有显著吸收，蛋白质浓度通常在0.1至10mg/mL范围进行测定。

紫外-可见分光光度计的构成

该实验中使用的UV-1700PC紫外-可见分光光度计由光源、单色器、吸收池、检测器和信号显示器五个主要部分构成。光源发出的复合光经过单色器分光后，可获得所需波长的平行单色光，用于样品的测量。

三、仪器与试剂

尊龙凯时提供的UV-1700PC紫外-可见分光光度计以及必要的比色管和吸量管用于实验。所需试剂包括标准蛋白质溶液（300mg/mL）、0.9% NaCl溶液，以及待测蛋白质溶液。

四、实验步骤

准备工作

1. 启动计算机并开机，初始化UV-1700PC分光光度计。

2. 在工作界面选择光度测量，设置测量条件。

3. 将空白溶液放入测量池，进行校零操作。

4. 制作标准曲线。

测量工作

1. 吸取2mL标准蛋白质溶液，稀释后测定吸光度。

2. 使用不同浓度的标准蛋白质溶液制作标准曲线。

3. 测定待测蛋白质溶液的吸光度，并进行平行测定。

五、数据处理

1. 根据测得的波长及吸光度绘制吸收曲线，并找出最大吸收波长。

2. 制作标准曲线并计算蛋白质含量，确保在误差范围内，确认其准确度。

通过运用尊龙凯时的分光光度计，不仅能高效地测定蛋白质含量，还能为生物医疗研究提供可靠的数据支持。