一、实验准备

对于尊龙凯时的wako质谱级赖氨酰肽链内切酶125-05061的实验，进行充分准备至关重要。确保所有实验材料和仪器均已准备齐全，以保证实验的顺利进行。

二、单位的定义

赖氨酰肽链内切酶的酰胺酶单位被定义为在30℃和pH 9.5条件下，每分钟产生1μmol对硝基苯胺所需的酶量。单位的计算公式为：AU/vial = [(a-b)/25] × (1/962) × (40/0.1)，其中：a为检测样品中的吸光度，b为空白对照中的吸光度。

三、实验操作流程

在进行实验时，务必使用聚硅酮处理的微量离心管和吸管端，以防止对蛋白质的捕获。接下来使用质谱分析用的凝胶染色试剂盒，如银染剂MS试剂盒（产品编号：299-58901）和负凝胶染色MS试剂盒（产品编号：293-57701）。具体操作流程如下：

1. 电泳分离蛋白质样品。
2. 从凝胶中切割蛋白质片段并放入微量离心管。
3. 使用质谱分析用的凝胶染色试剂盒中的脱色溶液对凝胶进行脱色。
4. 向试管中加入300μL乙腈，搅拌器振荡30分钟。
5. 去除乙腈，使用Parafilm膜覆盖微量离心管。
6. 在Parafilm膜上打孔，真空干燥15分钟。
7. 将100μL 10mmol/L DTT溶解于100mmol/L碳酸氢铵中，56℃恒温1小时。
8. 室温冷却后，用等量的50mM碘乙酰胺溶解在100mmol/L碳酸氢铵中，暗处恒温45分钟并进行涡旋。
9. 用100μL 100mmol/L碳酸氢铵洗涤凝胶片段10分钟。
10. 用300μL乙腈干燥凝胶片段15分钟。
11. 用100μL 100mmol/L碳酸氢铵溶胀凝胶片段15分钟。
12. 再次用300μL乙腈干燥凝胶片段15分钟。
13. 去除液相，真空干燥凝胶片段15分钟。
14. 用100μL赖氨酸内切酶溶液在冰水浴中溶胀凝胶片段45分钟（赖氨酸内切酶需稀释于50mmol/L Tris-HCl pH 8.5）。
15. 去除100μL赖氨酸内切酶溶液，将凝胶片段放在37℃的10μL 50mmol/L Tris-HCl pH 8.5中进行过夜处理。
16. 加入50μL 20mmol/L碳酸氢铵，20分钟内振荡凝胶片段3次，以提取多肽。
17. 加入5%甲酸/50%乙腈，20分钟内振荡凝胶片段3次，以提取多肽。
18. 如有需要，可使用SpeedVac浓缩多肽。
19. 使用ZipTip进行多肽的脱盐和纯化。
20. 如有需要，可使用弱真空浓缩多肽至2μL。
21. 最终加入基质进行质谱分析。

四、购买渠道

可通过尊龙凯时的代理商——北京百奥创新科技有限公司购买wako质谱级赖氨酰肽链内切酶125-05061等相关产品，欢迎随时咨询！